京都大学本科生研究小组开发的廉价且简单的DNA克隆技术
23-06-01

京都大学本科生研究团队iGEM Kyoto的成员Alexander Y. Liu,古賀大翔和合屋智寻3名学生共同开发了一种新型的DNA克隆反应解决方案。仅仅混合两种酶就可以完成目标,所需成本为昂贵的市场试剂的千分之一,而性能则与市场上的试剂达到同等效果。

论文信息:【Genes to Cells】Quick and affordable DNA cloning by reconstitution of Seamless Ligation Cloning Extract using defined factors

DNA克隆是分子生物学的核心技术,需要用“剪刀”和“胶水”对DNA进行复杂的技术工程。虽然近来已经开始使用一种叫做“同源重组”的简单方法,但其所需要的昂贵试剂使得许多实验室受到严峻的预算压力。

由于预算较少,研究团队对于购买昂贵的试剂始终犹豫不决,为此,他们开始研究,看是否可以通过自己的力量制作出新的反应溶液。团队着眼于使用通过特殊方法从大肠杆菌中提取的溶液“SLiCE”可以进行“同源重组”的报告,与京都大学的北畠真副教授共同开始了对于SLiCE的活性成分有效鉴定。

研究结果发现,核酸外切酶III(ExoIII)和核酸外切酶T(ExoT)负责其主要活性。通过简单地混合这两种酶,研究人员成功地完全再现了溶解了无数蛋白质的SLiCE的活性。研究小组决定购买其中负责主要活性的ExoIII,通过稀释使用,市场上1万日元购买的试剂可以进行80万次重组反应(商业试剂盒每次重组反应的费用约为1,500日元)。由此,以非常低廉的价格制作与高价试剂相媲美的混合试剂便成为了可能。

制作后的混合试剂能够在非常稳定的条件下储存,即使长期储存,也不会出现活性降低现象。该发现有望大大降低全世界DNA克隆技术的成本。

消息来源:安価で簡便なDNAクローニング技術、京都大学の学部生研究団体が開発 – 大学ジャーナルオンライン (univ-journal.jp)

        

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